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液相色谱定量分析原理及相关知识点

发表时间:2022-11-14      点击次数:167

液相色谱定量分析原理

在定性的基础上定量,需有纯物质作为标准物

液相色谱定量是相对定量的方法:即由已知量的纯标样推算混合物中被测物的量

定量的依据是:

被测组分的量与响应值(峰高或峰面积)成正比

由已知量的标样可求得定量校正因子

定量校正因子:是定量计算公式中的比例常数,其物理意义是单位响应值(峰面积)所代表的被测组分的量

测定未知组分的响应值,通过定量校正因子即可求得其含量


液相色谱定量分析的步骤

1、选择一个适合定量分析的色谱方法:

确认被检测组分峰,并达到分离度(R)大于1.5

确定被测组分色谱峰的一致性(纯度)

确定方法的检测限及定量限;灵敏度及线性范围


2、用不同浓度的标准样品建立校正曲线

3、考查定量方法的准确度及精密度

4、用相应的色谱管理软件实施样品采集,数据处理及报告结果


鉴别需定量的色谱峰(定性)

定性鉴别每个要定量的色谱峰

先用标样确定欲定量之色谱峰的保留时间(Rt),通过比较保留时间,找到未知样中各色谱峰所对应的组份,色谱定性是用与标样比较保留时间的方法,判据并不充分

进一步的确认(定性)

1、标准加入法

2、同时用其它方法:其它色谱方法(改变机理,如:用不同的色谱柱) 、其它检测器 (PDA:光谱图比较、谱库检索;MS:质谱图解析、谱库检索)

3、其它仪器方法


确认定量峰的一致性


确认色谱峰的一致性(纯度)

保证每个色谱峰下只有一个被测的组份

检查是否有共流出的物质(杂质)干扰

色谱峰一致性(纯度)确认的方法

用光电二极管矩阵(PDA)检测器比较光谱图

峰纯度鉴定

2996的纯度角理论

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